成果信息

本项目建立的新型固相辅助重组蛋白质折叠技术通过层析介质的介入，阻隔了蛋白分子之间的相互作用，降低了聚集体的形成。可克服传统稀释复性复性率低，体积大等的缺点，不仅可在较高浓度下进行蛋白质的重折叠，而且复性的同时可实现杂蛋白以及不同折叠结构的分离。已建立包括凝胶过滤、离子交换、疏水层析等多种介质的固相辅助复性以及单梯度、双梯度、三梯度等多种复性工艺。)

背景介绍

外源的重组蛋白质在细菌中大量表达时，往往会形成不可溶、无生物活性的蛋白质聚集体，称为包涵体。由于细胞中缺乏帮助折叠的催化剂，使得高浓度的新生蛋白质来不及形成正确的折叠，暴露的疏水区相互作用而聚集。目前上市的重组蛋白药物中，54%是以大肠杆菌作为表达系统，而大肠杆菌中有一半形成包涵体。和可溶形式的蛋白质产物相比，包涵体具有很多优势，包括目标蛋白质纯度高，能够抵抗蛋白质酶的攻击，对宿主细胞的毒性小，易于纯化以及在纯化过程中不用考虑蛋白质失活等。许多膜蛋白在表达过程中，因为很难确定重组蛋白质在细胞内的位置，所以形成包涵体对后续操作非常有利。由包涵体形式存在的重组蛋白质的后处理过程包括菌体发酵，细胞破碎，包涵体回收，洗涤，变性溶解，复性以及最终产品的纯化等步骤，其中将溶解的包涵体进行复性是最为关键的一步，复性率通常只有5%-20%。因此，如何获得高的复性收率一直是基因工程下游技术的研究热点。)

应用前景

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